屋塵螨過(guò)敏原

背景簡(jiǎn)介：

支氣管哮喘（bronchial asthma，簡(jiǎn)稱哮喘）是一種以嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞反應(yīng)為主的氣道變應(yīng)性炎癥和氣道反應(yīng)性為特征的疾病。由于哮喘的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，病因與發(fā)病機(jī)理尚不明了，臨床實(shí)驗(yàn)受倫理及方法限制，因此需要通過(guò)構(gòu)建哮喘動(dòng)物模型來(lái)研究疾病發(fā)生發(fā)展以及制定相應(yīng)治療措施。塵螨是最常見(jiàn)的空氣過(guò)敏原，全球85%的哮喘患者對(duì)塵螨過(guò)敏。屋塵螨是一種免疫復(fù)合物，能夠激活先天免疫和后天免疫應(yīng)答。研究表明，HDM中的蛋白酶，如胰蛋白酶樣酶，催過(guò)敏有促進(jìn)作用，從而導(dǎo)致過(guò)敏幾天對(duì)塵螨的過(guò)敏反應(yīng)。
利用塵螨誘發(fā)動(dòng)物建立哮喘模型，方法簡(jiǎn)便，操作性強(qiáng)，且成功率高。

美國(guó)Greer 公司專注于過(guò)敏原檢測(cè)，提供各種動(dòng)物、植物及食品、真菌等各種過(guò)敏原提取物。塵螨過(guò)敏原提取物，廣泛應(yīng)用于哮喘模型的制備。

產(chǎn)品信息：

英文名稱：D.pteronyssinus ( House dust mite, HDM)

中文名稱：屋塵螨

貨號(hào)：XPB82D3A2.5  XPB82D3A25  XPB91D3A2.5  XPB91D3A25    XPB81D3A2.5  XPB81D3A25

規(guī)格：2.5ml/25ml

產(chǎn)品應(yīng)用：

1.該產(chǎn)品為凍干粉,一般推薦客戶參照COA中的蛋白濃度做稀釋，客戶收到貨后用去離子水或蒸餾水稀釋至相應(yīng)工作濃度或儲(chǔ)液濃度。比如：2.5ml包裝的，加入2.5ml水，因?yàn)槊總€(gè)批次的蛋白含量有差異，可根據(jù)質(zhì)檢報(bào)告，計(jì)算終濃度?？蛻粢部梢罁?jù)自身實(shí)驗(yàn)要求，稀釋到任意濃度。

2.過(guò)敏原稀釋后，如果一次用不完，推薦分裝后-20℃保存（可分裝成使用濃度后保存）。可凍融一次，解凍后，在一周內(nèi)用完。

3.凍干粉過(guò)敏原效期為10年。

4.常見(jiàn)的兩個(gè)比較相似的產(chǎn)品：B82 和B84，B82 和B84，均只代表D.pteronyssinus，不是實(shí)際訂貨貨號(hào)，D.pteronyssinus產(chǎn)品分粗制品和凍干粉，實(shí)貨都是凍干粉。凍干粉是粗品進(jìn)一步純化后的產(chǎn)品。B82和B84在粗品階段，只在純度上有細(xì)微差別,貨號(hào)分別為：RMB82M 和RMB84M。凍干粉的D.pteronyssinus只有XPB82D3A2.5這一個(gè)貨號(hào)（是由粗品RMB82M純化后獲得。）

參數(shù)說(shuō)明：

收到貨后，會(huì)有隨貨的質(zhì)檢報(bào)告（COA）。塵螨過(guò)敏原會(huì)有4個(gè)參數(shù)說(shuō)明，其他類過(guò)敏原，如食物、花粉類等過(guò)敏原只有2個(gè)參數(shù)（干重和蛋白含量）說(shuō)明。

以XPB82D3A2.5(Lot#385930)為例，參數(shù)說(shuō)明：

1）純過(guò)敏原（Der P1）： 是指純過(guò)敏原Der P1 的含量（當(dāng)然這個(gè)提取物的組分不只是只有Der P1,也有其他形式的，這個(gè)是主要的過(guò)敏原成分）。154.17mcg/vial 表示 Der P1 的含量是：154.17ug/瓶，mcg, microgram 微克的縮寫(xiě)。

2）干重（Dry Weight）: 干重16.7mg,  是去除水分后，瓶子里粉末的含量。

3）總蛋白（Protein） ：蛋白含量4.43mg， 是指：過(guò)敏原提取物的總蛋白含量。

4）內(nèi)毒素含量（Endotoxin）：內(nèi)毒素水平。塵螨有一款低內(nèi)毒含量（做過(guò)內(nèi)毒素處理），貨號(hào)為：XPB91D3A2.5/ XPB91D3A25（之前XPB70D3A2.5/ XPB70D3A25已停產(chǎn)），要比未做過(guò)內(nèi)毒素處理的XPB82D3A2.5/ XPB82D3A25內(nèi)毒素含量相對(duì)低很多（并不是不含內(nèi)毒素）。

低內(nèi)毒素的一般用于做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，但由于凍干過(guò)程中無(wú)法保證無(wú)菌，如果做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)做過(guò)濾除菌（0.22 um ）。

注意：

1）塵螨是提取物，提取物是混合物，不是純蛋白。由于工藝和每批過(guò)敏原原料差異，因此每個(gè)批次含量（參數(shù)）都不同。如果對(duì)含量有要求，特別是之前用過(guò)別的批次的，沒(méi)法保證和之前批次一致，請(qǐng)核對(duì)收到貨的COA，確認(rèn)符合您的要求再開(kāi)瓶。

2）過(guò)敏原提取物是混合物，不能作為標(biāo)準(zhǔn)品，如ELISA實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)準(zhǔn)品。

3）參考文獻(xiàn)中用過(guò)Greer 產(chǎn)品的，都沒(méi)有指出具體的是參照哪個(gè)參數(shù)？而且不同文獻(xiàn)用量差別也很大，因此沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)的方案推薦?？蛻粜枰鶕?jù)自己的實(shí)驗(yàn)摸索最佳的實(shí)驗(yàn)條件。

如果以純過(guò)敏原（Der P1）的含量為基準(zhǔn)，成本太高。

如果以：干重（Dry Weight）的含量為基準(zhǔn)，實(shí)際其中的過(guò)敏原的比例太低，不足以致敏。

根據(jù)客戶實(shí)際使用經(jīng)驗(yàn)，客戶驗(yàn)證過(guò)參照Protein 含量做是可以的，因此我們一般推薦客戶以“蛋白含量 Protein"為基準(zhǔn)，具體實(shí)驗(yàn)條件客戶需要自己摸索。

關(guān)于稀釋、保存:

1) 過(guò)敏原提取物均為干粉包裝，不是液體包裝。規(guī)格里的2.5ml 或25ml 指的是瓶裝規(guī)格。

客戶可以根據(jù)實(shí)際工作濃度，用蒸餾水稀釋到儲(chǔ)液濃度，比如：蛋白含量是：4.43mg，用：2.5ml 蒸餾水稀釋后，濃度就是：4.43mg/2.5ml=1.772mg/ml。

2) 塵螨干粉效期是10年，干粉室溫或4℃保存。稀釋后分裝-20℃凍存（保證濃度在：0.1mg/ml以上），效期1年。

注意事項(xiàng)：

1.  蛋白含量不是重量， 不要用天平去稱量，這個(gè)蛋白含量的測(cè)定COA里有說(shuō)明，是Bradford法測(cè)定的，請(qǐng)不要用天平去稱量。如果用天平去稱量了，會(huì)導(dǎo)致無(wú)法定量，請(qǐng)不要做此操作。例如：您要用50ug 的量，那您可以根據(jù)您稀釋后的濃度（比如：1.772mg/ml），可以根據(jù)這個(gè)算出您取多少體積的量就可以了。這樣是可以準(zhǔn)確定量的。

2.  玻璃瓶易碎，請(qǐng)不要置于-80℃保存。

D.pteronyssinus 屋塵螨過(guò)敏原

產(chǎn)品引用文獻(xiàn)：

1. D Canbaz.Immunotoxicity of organophosphate flame retardants TPHP and TDCIPP on murine dendritic cells in vitro

2.L Utsch.Allergic sensitization is associated with inadequate antioxidant responses in mice and men.

3.DD Le.Allergic airway inflammation induces the migration of dendritic cells into airway sensory ganglia

4.SJ Tavernier.Opposing regulation and roles for PHD3 in lung dendritic cells and alveolar macrophages

5.John S. House.Genetic variation in HTR4 and lung function: GWAS follow-up in mouse.

6.KK Penberthy.Ex vivo modulation of the Foxo1 phosphorylation state does not lead to dysfunction of T regulatory cells.

7.W Huang.Beyond type 1 regulatory T cells: co-expression of LAG3 and CD49b in IL-10-producing T cell lineages.

8.Matthew T.Mechanism for initiation of food allergy: Dependence on skin barrier mutations and environmental allergen costimulation

9.LO Cruz.Excessive miR-27 expression impairs regulatory T cell-mediated immunological tolerance.

10.T. H. Acciani.Epidermal growth factor receptor signalling regulates granulocyte–macrophage colony‐stimulating factor production by airway epithelial cells and established allergic airway disease.

11.MY Tjota.Signaling through FcRγ-associated receptors on dendritic cells drives IL-33–dependent TH2-type responses.

12.TH Acciani.Diesel exhaust particle exposure increases severity of allergic asthma in young mice.

13.Zhimei Yang.Roles of Bronchopulmonary C-fibers in airway Hyperresponsiveness and airway remodeling induced by house dust mite.

14.MY Tjota.Activation of antigen presenting cells through FcRγ drivesIL-33 dependent Th2-type responses in the lungs.

15.SS Folmsbee.The cardiomyocyte protein αT-catenin contributes to asthma through regulating pulmonary vein inflammation.