結(jié)腸炎模型誘導方案

背景簡介：

腸炎是一種病因不明的多因素疾病，主要的腸炎有2種，潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病。潰瘍性結(jié)腸炎主要影響大腸或結(jié)腸，而可能影響胃腸道的任何部分。為了研究潰瘍性結(jié)腸炎，葡聚糖硫酸鈉（DSS）常被用于誘導實驗動物的結(jié)腸炎通過調(diào)整DSS濃度或給藥周期，很容易誘發(fā)急性、慢性或復發(fā)性結(jié)腸炎。我公司為科研用戶提供用于誘導結(jié)腸炎的右旋糖酐硫酸鈉（DSS），以及評估其特征和并發(fā)癥的工具，用于模擬人結(jié)腸炎。

操作流程：

1）急性腸炎造模：選取成年動物正常飼養(yǎng)1-2周→2-5%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征。

2) 慢性腸炎造模：選取成年動物正常飼養(yǎng)1-2周→2-3%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征→停止飲用DSS，改正常飲水7-14天→重復2-3%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征→重復停止飲用DSS，改正常飲水7-14天

3) 灌胃造模：每天分別于10:00, 14:00和18:00給予2%DSS溶液灌胃，每次30ml/kg，不另予飲水。每天末次灌胃后給予足量混合配方顆粒飼料，次日8:00取走飼料。造模時間9天。

常見問題

1. Q: 成功誘導結(jié)腸炎動物模型的關(guān)鍵因素是什么？

A: DSS的分子量、DSS溶液的濃度、動物的種類和品系以及提供給動物的飼料種類。

2. Q: DSS造模的操作流程？

1）急性腸炎造模：選取成年動物正常飼養(yǎng)1-2周→2-5%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征。

2) 慢性腸炎造模：選取成年動物正常飼養(yǎng)1-2周→2-3%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征→停止飲用DSS，改正常飲水7-14天→重復2-3%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征→重復停止飲用DSS，改正常飲水7-14天

3) 灌胃造模：每天分別于10:00, 14:00和18:00給予2%DSS溶液灌胃，每次30ml/kg，不另予飲水。每天末次灌胃后給予足量混合配方顆粒飼料，次日8:00取走飼料。造模時間9天。 參考文獻：葡聚糖硫酸鈉自由飲用與定量灌胃誘導小鼠急性結(jié)腸炎模型的比較研究，胃腸病學 2009，14（1），27-30。

3. Q: 誘導結(jié)腸炎動物模型時需要注意哪些條件？

1) 用無菌水配制DSS溶液，詳細的濃度請參考我們的應用指南。使用前，建議使用 0.22 µm的過濾。

2) 每1-2天更換一次新配置的DSS溶液。

3) 為了清楚地觀察造模進展, 建議每個籠子2-3只動物，最多不超過每個籠子5只動物。

4) 使所有動物的生存條件一致。

4. Q: DSS引起結(jié)腸炎的原理是什么？

參考文獻：Gastroenterology, 2002, 123(1):256-270;J Immunol, 2004, 172(9): 5664-5675; 胃腸病學和肝病學雜志 2013, 22(12): 1221-1224; 炎性腸病，1998，124-125；J Pharmacol Toxi-colog Methods, 2004, 50(1):81-81

5. Q: 小鼠和大鼠每天的飲水量是多少？

小鼠每天的飲水量為7-10ml，大鼠11ml/100g體重/天。

6. Q: 分子量是否影響結(jié)腸炎模型的建立結(jié)果？

36,000 - 50,000Da是結(jié)腸炎模型建立的最佳DSS分子量范圍。低分子量DSS具有較弱的炎性作用，分子量越大，吸收越困難。

7. Q: 為什么不同批次的DSS使用濃度會有差異？

DSS是葡聚糖聚合物，分子量為平均分子量，每個批次之間會有分子量的差異，而分子量對腸炎造模有影響。通常DSS批間比較穩(wěn)定，但是也有少部分批間差會大一些，所以建議客戶根據(jù)自己的實驗需求，購買足夠的同一批次產(chǎn)品，或者換用批次之前進行預實驗。

8. Q: 小鼠3%的DSS飲用3天后沒有出現(xiàn)明顯的體重下降？

某些動物出現(xiàn)反應慢，甚至在飲用DSS第5天才出現(xiàn)體重下降，屬于正?，F(xiàn)象。如果7天未出現(xiàn)明顯癥狀，則重新進行實驗，并增加0.5-1%的DSS的飲用濃度。

9. Q: DSS造模后出現(xiàn)小腸出血正常嗎？

DSS飲用濃度過高會導致小腸出血，輕度小腸出血無明顯影響，若出血過多，可降低DSS的濃度。

10. Q: DSS飲用后體重下降明顯，但是病理切片HE染色沒有炎癥現(xiàn)象

DSS的飲用達到一定閾值才能成功誘導腸炎，閾值如果達不到，體重可以出現(xiàn)下降，但是病理無炎癥表現(xiàn)。

11. Q: 為什么同一籠的小鼠出現(xiàn)的癥狀有差異？

動物之間存在個體差異，不同的動物飲水量可能不同，而且不同的動物對DSS的耐受性也不同。

12. Q: 為什么慢性腸炎模型的第二個周期飲用相同濃度的DSS，動物出現(xiàn)的癥狀沒有第一個周期明顯？

動物飲用DSS一段時間后會有耐受性，所以第二個周期出現(xiàn)癥狀減弱為正?，F(xiàn)象。

13. Q: DSS造模與TNBS造模有什么不同？

TNBS誘導的腸炎與克隆恩病相似，與潰瘍性結(jié)腸炎相似度低。TNBS致炎病程更長，個體差異更大。

14. Q: 是否可以高壓滅菌？

不可以，會導致DSS的分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。

15. Q: 從DSS誘導小鼠的糞便樣本中提取DNA，結(jié)腸組織中提取的RNA中會有DSS殘留，會抑制下游PCR，RT-PCR實驗，如何處理？

精胺可以去除DSS對PCR的抑制。參考文獻：Journal of Microbiological Methods ，2018 Jan, 144: 1-7

16. Q: DSS造模期間是否可以進行不同時間點的檢測，觀察DSS飲用前期什么時間會造成上皮屏障破壞？

可以，一般2天造成上皮屏障破壞，可以選擇3、5、7天；進行病理檢測。

17. Q: 小鼠與大鼠的品系？

小鼠常用品系C57背景純，誘導腸炎更穩(wěn)定。使用Babl/c小鼠時，要做好預實驗；大鼠常用品系SD和Wistar

18. Q: 小鼠的體重建議？

建議按照周齡來選擇，推薦8-12周小鼠，體重約22g左右。

19. Q: DSS可以用于細胞實驗嗎？

可以，參考文獻：YAP triggers the Wnt/β-catenin signaling pathway and promotes enterocyte self-renewal, regeneration and tumorigenesis after DSS-induced injury. cell death and disease, 2018(9):153

20. Q: DSS可以用超聲進行溶解嗎，會破壞其分子結(jié)構(gòu)嗎？

DSS易溶解，無需超聲即可溶解。如果必須使用超聲，也是可以的。

21. Q: DSS除引起結(jié)腸損傷，還會引起肝臟，脾臟損傷嗎？

DSS除導致腸道損傷外，會加速非酒精性肝硬化的進展，部分客戶偶爾發(fā)現(xiàn)對正常動物的肝臟也會有損傷，但對脾臟的損傷未見有報道。

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